蚯蚓纤溶酶7#组分基因在甲醇酵母中的克隆与表达

doi:10.3969/j.issn.1000-1565.2005.06.016

摘要/Abstract

摘要： 为了使蚯蚓纤溶酶(EFE)最佳活性组分EFE-7#基因在甲醇酵母(Pichia pastoris)中获得表达,构建了表达载体pPIC9K-EFE,通过对电击条件的优化,转化率达到5×103个/μg DNA.为了便于筛选阳性克隆,以该基因的原核表达产物为抗原免疫动物,获得了与天然EFE-7#组分具有相同免疫特异性的抗体.用该抗体为探针对上述转化子进行筛选,得到了上百株阳性重组子.RT-PCR和western blotting证明,EFE-7#基因在这些重组子中获得了表达,表达产物相对分子质量高于天然产物.

关键词: 蚯蚓纤溶酶, 甲醇酵母, 表达, 抗体, 筛选

中图分类号:

Q786

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