为了研究牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D体外抗肿瘤活性及作用机制,用MTT法检测6.25～100 mg/L 2-hydroxyyunnandaphnine D分别作用于人肝癌细胞(HepG-2)、人乳腺癌细胞(MCF-7)及人宫颈癌细胞(HeLa)后不同时间点的细胞存活并计算细胞增殖抑制率和IC50；FDA/PI双染色荧光显微镜观察细胞死亡情况；分光光度法检测Caspase-3酶活性变化；MTT法检测凋亡抑制剂Z-VAD-FMK对2-hydroxyyunnandaphnine D抑瘤活性的影响.结果显示:2-hydroxyyunnandaphnine D对3种瘤株均有明显的抑制作用,且具有明显的时效量效关系,其48 h的IC50值分别为(1.30±0.09),(7.32士0.10)和(8.41士0.11)mg/L.FDA/PI双染色荧光显微镜观察显示2-hydroxyyunnandaphnine D组中死亡细胞数较正常对照组细胞死亡数量增加,且随着剂量的加大细胞死亡数量增加.MTT法显示凋亡抑制剂Z-VAD-FMK不能阻断2个浓度的2-hydroxyyunnandaphnine D对HepG-2细胞的增殖抑制作用.Caspase-3酶活性测定显示10,30 mg/L 2-hydroxyyunnandaphnine D作用后肿瘤细胞的Caspase-3酶活力单位与正常对照组比较无统计学意义.结果表明:牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D在体外具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制并非通过激活Caspase-3途径.
[1] 吴虹, 韦敏. 植物来源的生物碱抗肿瘤活性及其作用机制研究进展 [J]. 医学信息（上旬刊） 2011.
[2] 曹志然, 王海, 唐志远, 王永丽. 4种源于虎皮楠的生物碱对人肝癌细胞株HepG-2增殖的影响 [J]. 医学研究与教育 2010.doi:10.3969/j.issn.1674-490X.2010.06.002
[3] 朱文粮, 罗都强, 刘召阳, ZHU Wen-liang, LUO Du-qiang, LIU Zhao-yang. 牛耳枫中生物碱的研究 [J]. 天然产物研究与开发 2010.doi:10.3969/j.issn.1001-6880.2010.06.027
[4] 赵斌, 葛金芳, 朱娟娟, 黄晓晖, 李俊. 小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC50的计算方法 [J]. 安徽医药 2007.doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2007.09.042
[5] 李中海, 端木德强, 王敬泽. 凋亡抑制蛋白XIAP研究进展 [J]. 河北大学学报(自然科学版) 2003.doi:10.3969/j.issn.1000-1565.2003.01.028
[6] 王淳, 陈誉华, 陈澄. Paraptosis--一种新的细胞死亡方式 [J]. 解剖科学进展 2002.doi:10.3969/j.issn.1006-2947.2002.03.021
[7] 洪振亚, 周剑峰, 刘文励. Caspase非依赖性细胞程序性死亡 [J]. 国际输血及血液学杂志 2006.doi:10.3760/cma.j.issn.1673-419X.2006.02.011
[8] 陈同生, 王小平, 孙磊, 王会营, 王龙祥, CHEN Tong-sheng, WANG Xiao-ping, SUN Lei, WANG Hui-ying, WANG Long-xiang. 紫杉醇诱导不依赖于Caspase-3细胞类似Paraptosis的荧光光谱分析 [J]. 光谱学与光谱分析 2008.doi:10.3964/j.issn.1000-0593(2008)11-2623-05
[9] 陈同生, 王小平, 孙磊, 王会营, 王龙祥, CHEN Tong-sheng, WANG Xiao-ping, SUN Lei, WANG Hui-ying, WANG Long-xiang. 紫杉醇诱导ASTC-a-1细胞的程序性死亡机制研究 [J]. 光电子·激光 2008.doi:10.3321/j.issn:1005-0086.2008.12.033
[10] Fan CQ, Yin S, Xue JJ, Yue HM. Novel alkaloids, paxdaphnines A and B with unprecedented skeletons from the seeds of Daphniphyllum paxianum [J]. Tetrahedron 2007, 1(1).
[11] Shizuka Saito, Takaaki Kubota, Jun'ichi Kobayashi. Calyciphylline G, a novel alkaloid with an unprecedented fused-hexacyclic skeleton from Daphniphyllum calycinum [J]. Tetrahedron letters: The International Journal for the Rapid Publication of Preliminary Communications in Organic Chemistry 2007, 32(32).
[12] 王敏, 王学习, 贾正平, 王彬. 瑞香狼毒总生物碱的抗肿瘤活性和机理研究 [J]. 中药材 2010.
[13] Luo, D.-Q., Zhu, W.-L., Yang, X.-L., Liang, S.-J., Cao, Z.-R.. Two new daphniphyllum alkaloids from Daphniphyllum calycinum [J]. Helvetica chimica acta 2010, 6(6).
[14] 吕翠仙, 樊廷俊, 胡国斌, 丛日山. 凋亡诱导因子与细胞凋亡 [J]. 2003.
[15] Li, YM, Li, Q, Wang, ZG, Liang, D, Liang, S, Tang, XB, Guo, L, Zhang, R, Zhu, DL. 15-HETE suppresses K+ channel activity and inhibits apoptosis in pulmonary artery smooth muscle cells [J]. Apoptosis: An international journal on programmed cell death 2009, 1(1).
[16] Yoon MJ, Kim EH, Lim J. Superoxide anion and proteasomal dysfunction contribute to curcumin-induced paraptosis of malignant breast cancer cells. [J]. Free Radical Biology and Medicine: The Official Journal of the Oxygen Society 2010, 5(5).
[17] Asare N, Landvik NE, Lagadic-Gossmann D, Rissel M, Tekpli X, Ask K, Lag M, Holme JA. 1-Nitropyrene (1-NP) induces apoptosis and apparently a non-apoptotic programmed cell death (paraptosis) in Hepa1c1c7 cells. [J]. Toxicology and Applied Pharmacology 2008, 2(2).
[18] 解树涛. 康宁霉素(Triehokonins)抗菌、抗肿瘤活性及作用机制 [D]. 济南:山东大学 2007.
