河北大学学报(自然科学版) ›› 2013, Vol. 33 ›› Issue (6): 642-647.DOI: 10.3969/j.issn.1000-1565.2013.06.016

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LGR5 shRNA真核表达载体的构建及在MKN28细胞的干扰效果检测

谢园园,曹文静,赵帅,樊武舫,吴琛   

  1. 河北大学生命科学学院,河北保定,071002
  • 出版日期:2013-11-25 发布日期:2013-11-25
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目,河北省自然科学基金资助项目,河北省教育厅科学研究计划项目,河北省教育厅优秀青年基金资助项目

Construction of shRNA eukaryotic expression vector targeting human LGR5 and detection of interference efficiency in MKN28 cell line

XIE Yuanyuan,CAO Wenjing,ZHAO Shuai,FAN Wufang,WU Chen   

  • Online:2013-11-25 Published:2013-11-25

摘要: 构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5 cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建成功的特异性表达载体(pG-PU6/GFP/Neo-LGR5)转染人胃腺癌细胞系后,应用荧光显微镜分析转染效率.利用荧光实时定量PCR对细胞内源性LGR5的表达进行检测.测序结果表明:靶向LGR5的重组pGPU6/GFP/Neo-LGR5载体构建成功.荧光实时定量PCR结果显示:与对照组相比,LGR5 shRNA真核表达载体可以使胃腺癌细胞中LGR5的mRNA水平明显降低78.96% (P<0.01).本工作可以为进一步研究LGR5在胃癌发生发展中的作用提供帮助.

关键词: LGR5基因, shRNA真核表达载体, 胃腺癌细胞MKN28

Key words: LGR5, short hairpin RNA eukaryotic expression vector, MKN28

中图分类号: