大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究

doi:10.3969/j.issn.1000-1565.2016.04.013

河北大学学报(自然科学版) ›› 2016, Vol. 36 ›› Issue (4): 412-416.DOI: 10.3969/j.issn.1000-1565.2016.04.013

大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究

马银良,刘爽,崔亚琦,康现江,刘秀华

收稿日期:2015-10-16 出版日期:2016-07-25 发布日期:2016-07-25
通讯作者: 刘秀华(1981—),女,河北泊头人,河北大学副教授,主要从事蛋白质结构与功能研究.E-mail:xiuhualiu@hbu.edu.cn
作者简介:马银良(1989—),男,河北邢台人,河北大学在读硕士研究生. E-mail:mayinliang@outlook.com 〓通信作者:刘秀华(1981—),女,河北泊头人,河北大学副教授,主要从事蛋白质结构与功能研究. E-mail:xiuhualiu@hbu.edu.cn
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(31300056);河北省自然科学基金资助项目(C2014201039);河北省教育厅优秀青年基金资助项目(YQ2014007);河北大学自然科学基金资助项目(2011-220)

Cloning,expression,purification and crystallization of murein-tripeptide amidase MpaA from Escherichia coli O157

MA Yinliang,LIU Shuang,CUI Yaqi,KANG Xianjiang,LIU Xiuhua

College of Life Sciences, Hebei University, Baoding 071002, China

Received:2015-10-16 Online:2016-07-25 Published:2016-07-25

摘要/Abstract

摘要： 采用分子克隆方法将来源于大肠杆菌O157的mpaA基因构建入pET-21b(+)表达载体.诱导MpaA蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达,通过Ni亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析三步法纯化得到高纯度蛋白.使用气象扩散法进行蛋白质晶体生长的初步筛选与优化,得到MpaA蛋白质单晶,并使用X射线衍射仪进行衍射数据的收集与处理.MpaA晶体分辨率为0.26 nm,属于P31空间群,晶胞参数为a=5.989 3 nm,b=5.989 3 nm,c=12.987 0 nm,β=90.000 °.MpaA晶体衍射数据的收集为后续结构解析和催化机制的阐明提供了基础.

关键词: 大肠杆菌O157, 肽聚糖水解酶, MpaA, 晶体

Abstract: The gene mpaA from Escherichia coli O157 was inserted into pET-21b(+)vector using molecular cloning method.The recombinant protein MpaA was overexpressed in E.coli BL21(DE3)competent cells,and purified to homogeneity sequentially via a three-step protocol consisting of Ni-chelating affinity column,ion-exchange column and size-exclusion column chromatography.Crystallization search and optimization for MpaA were carried out using the sitting-drop vapour-diffusion method.The MpaA crystal diffracted to 0.26 nm resolution and belonged to the space group P31,with unit-cell parameters a=5.989 3 nm,b=5.989 3 nm,c=12.987 0 nm and β=90.000 °.Preliminary crystallographic analysis builds up a good foundation for the structural determination and catalytic mechanism of MpaA.

Key words: Escherichia coli O157, peptidoglycan hydrolase, MpaA, crystal

中图分类号:

马银良,刘爽,崔亚琦,康现江,刘秀华. 大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究[J]. 河北大学学报(自然科学版), 2016, 36(4): 412-416.

MA Yinliang,LIU Shuang,CUI Yaqi,KANG Xianjiang,LIU Xiuhua. Cloning,expression,purification and crystallization of murein-tripeptide amidase MpaA from Escherichia coli O157[J]. Journal of Hebei University (Natural Science Edition), 2016, 36(4): 412-416.

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大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究

Cloning,expression,purification and crystallization of murein-tripeptide amidase MpaA from Escherichia coli O157

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